從1565年開始，李時珍到過武當山、廬山、茅山、牛首山以及湖廣、安徽、河南、河北等地，收集了很多草藥標本和處方。為了學習醫藥知識，他拜漁人、樵夫、農民、車夫、藥工、捕蛇者為師，并參考了925種歷代醫藥書籍。他進行了考古研究，探究了物質的性質，記錄了上千萬字的筆記，解答了很多疑難問題。經過27年的艱苦努力，多次修改，到明朝萬歷十八年，他完成了巨著《本草綱目》，全書長達192萬字。此外，他還研究了脈搏學和奇經八脈。他還寫了多種著作，包括《奇經八脈考》、《瀕湖脈學》等，他因此被譽為“藥圣”。